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MTX,BIM人甲胺喋呤酶聯免疫試劑盒

MTX,BIM人甲胺喋呤酶聯免疫試劑盒

簡要描述:MTX,BIM人甲胺喋呤酶聯免疫試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人甲胺喋呤(MTX)的含量。

產品型號:

所屬分類:人酶聯免疫試劑盒

更新時間:2022-08-27

詳細說明:

MTX,BIM人甲胺喋呤酶聯免疫試劑盒

 

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人甲胺喋呤MTX)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人甲胺喋呤(MTX)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人甲胺喋呤(MTX)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

 

二.實驗材料與試劑配制

1.儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。

2. 洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。

三.樣品收集、處理及保存

1).細胞培養上清:

適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

2)細胞:

用PBS反復洗滌細胞3次,調整細胞濃度達到104-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

3)血清:

在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4)血漿:

應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

5)體液:

包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

6.)組織標本:

切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000 rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

7)保存:

如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

四.操作步驟

1)取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。

2)分組:取出96孔板,根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組(6個濃度)、空白孔、待測樣品組。

3)標準品的稀釋:準備小試管6 只,依次編好號碼,先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul,然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號標準品。

注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。

4)加樣:依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

5)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6)洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒棄去,如此重復5 次,拍干。

7)加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液(空白對照孔除外)。

8)溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。

9)洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙*拍干。

10)顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。

11)終止:25-37℃下避光反應10-15分鐘,加入50ul終止液。

12)讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。

注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內,以免影響準確性。

五.數據計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,即為樣品的實際濃度。

六.注意事項

1)實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。

2)加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔間的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性。

3)孵育:嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。

反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如果顏色較深,請提前加入終止液終止反應。

4)建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍數。

5)建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經銷商,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調換,但概不承擔產品本身以外的任何損失。

七.訂貨說明

1)賣方確保所訂產品與目錄技術指標保持*;

2)為了確保買方產品在運輸中的質量,對有特殊要求的低溫產品予以濕冰運輸。

3)收到貨物后如出現質量問題,買方需在收到貨物一個月內向賣方提出書面異議。買方逾期不提出異議,視為貨物符合其要求,賣方不付任何責任。

4)出現質量以外的問題,如破損等,買方應在收貨后一個周內提出。買方未按時提出異議,視為該產品合格。

本公司對所有售出的產品保證質量,并提供良好的售后服務,有關產品質量的投訴,請在收到貨物的32天內以書面形式提出,并向我公司技術人員提供相應的材料,我們會及時派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產品本身,不涉及其他間接內容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒,均可享受免費代測服務,并提供技術指導。

 



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