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恒遠(yuǎn)生物|微生物染色方法

更新時(shí)間:2024-02-26 點(diǎn)擊量:852

  微生物染色方法一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色,但不能鑒別微生物。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染料,有協(xié)助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法,此外還有鑒別細(xì)胞各部分結(jié)構(gòu)的(如芽胞、鞭毛、細(xì)胞核等)特殊染色法。食品微生物檢驗(yàn)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。


1、單染色法


  用一種染色劑對(duì)涂片進(jìn)行染色,簡(jiǎn)便易行,適于進(jìn)行微生物的形態(tài)觀察。在一般情況下,細(xì)菌菌體多帶負(fù)電荷,易于和帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。因此,常用堿性染料進(jìn)行單染色,如美蘭、孔雀綠、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫和中性紅等。若使用酸性染料,多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時(shí),必須降低染液的PH值,使其呈現(xiàn)強(qiáng)酸性(低于細(xì)菌菌體等電點(diǎn)),讓菌體帶正電荷,才易于被酸性染料染色。


單染色一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗和干燥五個(gè)步驟。


染色結(jié)果依染料不同而不同:


石碳酸復(fù)紅染色液:著色快,時(shí)間短,菌體呈紅色。  


美蘭染色液:著色慢,時(shí)間長(zhǎng),效果清晰,菌體呈蘭色。


草酸銨結(jié)晶染色液:染色迅速,著色深,菌體呈紫色。


2、革蘭氏染色法


革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。


       細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去,有的可被脫去,因此可把細(xì)菌分為兩大類,前者叫做革蘭氏陽性菌(G+),后者為革蘭氏陰性菌(G-)。為觀察方便,脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽性菌仍帶紫色,陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)和球菌,以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng);弧菌,螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。

  革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別,染色反應(yīng)不一樣?,F(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物,它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢,不易脫色,陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底,吸附染料差,易脫色,這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。

  另外,陽性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低,在相同PH條件下進(jìn)行染色,陽性菌吸附堿性染料很多,因此不易脫去,陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴(yán)格控制。例如,在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色,兩類菌吸附堿性染料都多,都可呈正反應(yīng);PH很低時(shí),則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外,兩類菌的細(xì)胞壁等對(duì)結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致,陽性菌透性小,故不易被脫色,陰性菌透性大,易脫色。所以脫色時(shí)間,脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。


革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟,具體操作方法是:


1)涂片固定。


2)草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。


3)自來水沖洗。


4)加碘液覆蓋涂面染1分鐘。


5)水洗,用吸水紙吸去水分。


6)加95%酒精數(shù)滴,并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色,30秒后水洗,吸去水分。


7)蕃紅梁色液(稀)染10秒鐘后,自來水沖洗。干燥,鏡檢。


染色的結(jié)果,革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色,負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。


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